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T4 DNA连接酶
描述
Thermo Scientific T4 DNA 连接酶催化双螺旋 DNA 或 RNA 中并排的 5-磷酸基和 3-羟基端之间磷酸二酯键的形成。该酶可以修复双螺旋 DNA、RNA 或 DNA/RNA 杂合体中的单链缺口。其还可以将 DNA 片段与黏性末端或平末端结合，但对单链核酸无活性。T4 DNA 连接酶需要 ATP 作为辅因子。
产品优势
• 在 Themo Scientific 限制性内切酶、PCR 和 RT 缓冲液（补充 ATP 时）中均有活性
• 快速—在室温下于 10 分钟内完成黏性末端连接
• 随 PEG 溶液提供，用于高效平末端连接
应用
• 克隆限制性内切酶生成的 DNA 片段
•克隆 PCR 产物
• 将双链寡核苷酸连接子或接头与 DNA 相连
• 定点突变
• 扩增片段长度多态性 (AFLP)
• 连接酶介导的 RNA 检测（参见参考 3）
• 双螺旋 DNA、RNA 或 DNA/RNA 杂交体中的缺口修复
• 线性 DNA 的自环化。
包括
• T4 DNA 连接酶
• 10X T4 DNA 连接酶缓冲液
• 50% PEG 溶液
备注
• T4 DNA 连接酶与 DNA 的结合可能导致琼脂糖凝胶中发生条带位移。为避免发生这种情况，可使用 6X DNA 上样染料 & SDS 溶液在 70°C 下孵育样品 5 分钟或在 65°C 下孵育 10 分钟，在冰上冷却后进行电泳。
•在转化过程中，连接反应混合物的体积不得超过感受态细胞体积的 10%。
•在电转化之前，使用离心柱或氯仿提取去除连接混合物中的 T4 DNA 连接酶。提取得到的 DNA 可以使用乙醇进一步沉淀。
