一、 实验原理
细胞黏附性是维持组织结构稳定的基本条件，也是细胞运动和发挥功能的调节因素，并且对细胞的增殖、分化有重要影响。通常可分为两类，即细胞与细胞黏附和细胞与基质黏附。机体内许多细胞，如上皮细胞，需要牢固地定在某处发挥功能；另一些细胞，如白细胞，活跃运动，就需要不断调节细胞黏附。细胞黏附性的改变在肿瘤转移过程中也发挥着重要作用。恶性肿瘤具有从原发瘤分离及在体内扩散的能力，提示这些细胞在相互识别及黏附机制方面发生了改变。
二、应用简介
细胞粘附分子(cell adhesion molecules，CAMs) 是一类膜表面糖蛋白，它们以配体－受体特异性结合的方式介导细胞与细胞间、细胞与细胞外基质间的相互接触和结合并调节细胞功能，在胚胎发育和分化、正常组织结构的维持、炎症反应、免疫应答、凝血和血栓形成、创伤修复、肿瘤浸润与转移等许多生理和病理过程中发挥重要的生物学作用。
细胞粘附实验通常分为两类，即细胞与细胞粘附和细胞与基质粘附。机体内许多细胞，如上皮细胞固定在某处发挥功能；另一些细胞，如白细胞，活跃运动，就需要不断调节细胞粘附。细胞粘附性的改变在肿瘤转移过程中也发挥着重要作用。恶性肿瘤具有从原发瘤分离及在体内扩散的能力，提示这些细胞相互识别及粘附机制发生了改变。用到测定细胞粘附性的实验有：机械法测定细胞粘附性，发射性核素法测定细胞粘附性，细胞分离实验和肿瘤细胞聚集体形成实验。
三、 实验方法
1、将4.5×105个Hep3B细胞/孔传代于无菌6孔培养板中。
2、培养24h后，用Lipofectamine TM 2000将37LRP siRNA转染Hep3B细胞（两个平行孔，Lipofectamine TM 2000转染具体操作见方法7），转染后的细胞置37℃、5％CO2培养箱培养，48h后收集细胞。同时各有两个平行孔的细胞进行阴性对照转染及不行转染。转染终浓度即siRNA终浓度为100nmol/L。
3、培养48小时后收集细胞，用0.25%胰酶将贴壁培养细胞（约1×106个）从壁上消化下来并制成单细胞悬液。
4、用无血清MEM培养基将Matrigel配制成10ug/250ul（1:300）的人工基底膜胶备用。
5、96孔板每孔中铺Matrigel 2ug/50ul，放于超净台中风干过夜。
6、96孔板每孔加入适量无血清MEM细胞培养液(或PBS或生理盐水)，放置60－90分钟，洗去多余的胶；
7、取转染、阴性对照转染及不行转染的Hep3B细胞以4×103/孔接种在铺胶的96孔板中，设3个重复孔，放入37℃、5％CO2培养箱中分别培养20min、40min、60min。
8、在相应时间点取出96孔板，吸出培养液，用PBS洗3遍，洗去未粘附细胞。
9、每孔加入100 ul甲醇，固定15min。
10、每孔加入100 ul姬姆萨染液，染色15min，蒸馏水洗去染液。
11、在200倍显微镜下计数粘附细胞数量（每孔在固定位置取8个视野）
四、样本送检要求
五、案例展示
六、常见问题
1、细胞处理需要小心操作，尽量避免人为的损伤细胞。离心力在不损失细胞的前提下尽可能小，重悬细胞是动作要轻柔，避免多次反复的激烈吹打，不用涡旋振荡器。
2、染色培养时间根据细胞种类的不同和每孔内细胞数量的多少而异。一般情况下，白细胞较难染色，因此需要较长的培养时间。培养时间一般为1- 4小时，但在培养30分钟左右即可取出肉眼观察。
3、染色程度 (根据细胞种类而定，需要摸索一下条件)。当使用标准96孔板时，贴壁细胞的最小接种量至少为1,000个/孔 (100μl培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低，因此推荐接种量不低于2,500 个/孔 (100μl培养基)。如果要使用24孔板或6孔板实验，请先计算每孔相应的接种量，并按照每孔培养基总体积的10%加入染色液B。
4、有条件的情况下建议采用多通道移液器，可以减少平行孔间的差异。加染色液B试剂时，建议斜贴着培养板壁加，不要插到培养基液面下加，容易产生气泡，会干扰OD值读数。 OD值在0.4-2.0之间均可，最大值控制在1.0左右为宜，小于0.4或大于2.0请调整接种量和培养时间。
七、服务流程
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