您所在的位置: 首页 > 科研产品 > 高效RIPA裂解液
高效RIPA裂解液


产品简介

RIPA裂解(RIPA Lysis Buffer)是一种传统的细胞组织快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的WesternIP等。

RIPA的本意是Radio Immunoprecipitation AssayRIPA裂解液的配方有很多种,根据其裂解液的强度大致可以分为强、中、弱三类。RIPA裂解液()的主要成分为50mM Tris (pH 7.4)150mM NaCl1% Triton X-1001% sodium deoxycholate0.1% SDS,以及sodium orthovanadatesodium fluorideEDTAleupeptin等多种抑制剂,可以有效抑制蛋白降解。

RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品,可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂,不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

使用说明

对于培养细胞样品:

1、融解RIPA裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1 mM

2、对于贴壁细胞:去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰,可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后,细胞就会被裂解。

对于悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成50-100万细胞/管,然后再裂解。

3、充分裂解后,10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGEWestern和免疫沉淀等操作。

裂解液用量说明:通常6孔板每孔细胞加入150微升裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200微升或250微升。


医思倍微信
医思倍移动端
医思倍小程序