产品概述
DNA含量分析在流式细胞检测中，占有相当大的比例。通过这种方法，研究者可以进行抗癌药物的毒性评估，并对恶性肿瘤细胞的预后效果及进展程度进行分析。在细胞周期检测中，DNA含量也同样作为重要的分析手段而被广泛应用。通过细胞DNA含量的测定，可计算各细胞周期的百分率，也可通过DNA片段化检测、DNA双染标记等方法检测细胞凋亡。
Cell Cycle Assay Kit-PI/RNase Staining试剂盒，可快速完成细胞周期的分析，操作简便。本产品使用碘化丙啶 (PI) 作为DNA荧光染料，通过流式细胞术得到细胞周期中G0/G1，G2和S期细胞的比例。
所需的设备和材料
- 流式细胞仪（碘化丙啶PI:λex=535 nm，λem=617 nm）
- 37℃培养箱
- PBS缓冲液
- 1.5 ml微量管
- 100-1000 μl、20-200 μl、2-20 μl移液器
溶液制备
本产品在固定细胞及不细胞固定的情况下皆可使用。
配置Working solution (1 sample)
取500 μl Assay Buffer 后，分别加入25 μl PI Solution和2.5 μl RNase Solution。
＊工作液易遇光分解，请在使用前立即配置并用铝箔纸包裹避光保存。
配置好的工作液1天内用完。
基本操作
非固定细胞
1. 将细胞密度调整为1-5×106cells/ml a)。
2. 取1 ml的细胞悬液加入到1.5 ml微型管中，在1,000×g离心3 min b)。
3. 去除上清液后加入1 ml PBS缓冲液清洗细胞，在1,000×g离心3 min。
4. 去除上清液后加入0.5 ml Working Solution。
5. 在4℃避光培养30 min。
6. 涡旋振荡使细胞分散，在37℃避光培养30 min。
7. 涡旋振荡使细胞分散，用尼龙筛网过滤，以去除样品中的细胞团块 c)。
8. 用流式细胞仪检测。
a) 贴壁细胞用胰蛋白酶-EDTA消化细胞后，用PBS洗涤并离心收集细胞。
b) 根据不同的细胞种类，需适当调整转速与离心时间。
c) 样品处理后，剩余部分无法继续保存并使用。
固定细胞
1. 将细胞密度调整为1-5×106cells/ml a)。
2. 取1 ml的细胞悬液加入到1.5 ml微型管中，在1,000×g 离心3 min。
3. 去除上清，并在细胞团中加入1 ml的-20℃保存的70%乙醇。
4. 涡旋振荡使细胞分散，在4℃下静置2 h b)。
5. 在1,000×g 离心3 min后，去除乙醇 c)。
6. 加入1 ml PBS缓冲液清洗细胞，在1,000×g 离心3 min。
7. 去除上清液后加入0.5 ml Working Solution。
8. 涡旋振荡使细胞分散，在37℃避光培养30 min。
9. 涡旋振荡使细胞分散，在4℃避光培养30 min。
10. 涡旋振荡使细胞分散，用尼龙筛网过滤，以去除样品中的细胞团块 d)。
11. 用流式细胞仪检测。
a) 贴壁细胞用胰蛋白酶-EDTA消化细胞后，用PBS洗涤并离心收集细胞。
b) 根据不同的细胞种类，需适当调整固定时间。
c) 根据不同的细胞种类，需适当调整转速与离心时间。
d) 样品处理后可以在4℃以下保存并继续使用，但是保存时间长短与细胞种类有关。
